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 ZDC-IMAGE : 장시간의 Time Lapse 실험시 초점흐름 없는 일관된 이미지를 얻게하는 시스템.

 

   연구자들의 요청에 부흥코저 저희 Olympus에서는 장시간 동안 실시되는 Time lapse 실험 동안에도

   초점의 흐름 없이 최적화된 결과물을 얻을 수 있게 하기 위한 System을 개발해 왔습니다.

   현미경의 각 구성품에 대한 철저한 연구와 많은 개선 사항의 보완에 따라 저희는 ZDC-IMAGE를

   소개해 드리고저 합니다.

   특별한 작업을 위해 특수하게 고안된 이 진보된 System은 사용하시는 분으로 하여금 몇 시간이 넘는

   Time Lapse 실험에서도 각 촬영 순간마다 뛰어나고 정확한 이미지를 얻어낼 수 있게끔 합니다.

  IX81-ZDC : 초점 흐름 보상기능 (Focus drift compensation)의 연구용 전동 도립 현미경.
                     (
Time lapse 실험 동안에도 일관된 초점을 잡아낸다.)

 

  이 시스템은 Time lapse 실험이 실행되는 동안 각 Image를 얻기 전에 순간적으로 초점을 자동으로 확인합니다.

  Image상에서 초점을 자동으로 잡는 System들과는 달리 IX81-ZDC는 초점 대상으로서 Glass-Bottom dish 를 사용합니다.

  이것은 시료의 조건이나 크기에 구애 받지 않는 초점 보상을 가능하게 합니다.

  약한 IR laser가 초점 보상을 위해 사용되기에 여기광에 노출된 Cell이 손상되는 위험성이 없습니다.

 

  유리표면을 기반으로 한 ZDC의 초점 흐름 보상 원리

   1. 관찰 위치를 "Offset"으로 설정
   2. 설정된 Time lapse 시간이 흐른 뒤 관찰 지점으로부터 대물렌즈의 초점위치가 흐트러짐
   3. Image acquisition을 수행하기 전에 IR-laser가 유리표면을 탐지
   4. 초기의 Offset 위치로 되돌려 줌으로서 초점 흐름 보상이 됨. 0.8초안에 모든 과정이 이루어짐

 

TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy System)

Since 1997, Olympus has been a market leader in objective based Total Internal Reflection systems that allows evansecent wave illumination approximately 200nm into the specimen beyond the coverglass interface. Olympus extends that leadership role by offering three objectives for TIRFM including the world's highest NA objective, the 100X N.A. 1.65 objective.
The incredibly thin optical section created be TIRFM allows an extremely high signal to noise image to be collected. Popular applications include vesicle tracking, cellular adhesions and single molecule events.

 Olympus' original high N.A. objectives make it easy to produce an evanescent wave field. So little light is leaked that a high-contrast  image can be obtained against a dark background.
  * N.A. 1.65, 100X objective (APO100XOHR).
 Incompatible resolution and brightness (use special cover glass and immersion oil)

  * N.A. 1.45 objectives (PLAPON60XOTIRFM, PLAPO100XOTIRFM)
    UPLSAPO100XO (N.A. 1.4) (Use normal cover glass and immersion oil)

 After initial alignment of the single mode fiber to the laser head and TIRFM illuminator, a simple micrometer adjustment is all that is  required to move the laser position between TIRFM and widefield illumination.

 
Application
  Cell Surface Imaging
   - D. Axelrod
   - Cell/Substrate Contact / W. Reichert
      Single molecule imaging
   - Myosin, Actin with Cy3 labeled ATP / T. Yanagida
      Exocytosis (w/ High Speed Camera)
   - Exocytosis of single secretory granules in live cells using acridine orange / W. Almers
   - Using NA1.65 Objective Lens/ Dr. Terakawa
     Cardiac Ca2+ sparks
     (w/ High Speed Camera)
   - Using Ca-green / M. Morad